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為什么準(zhǔn)確率達(dá)95%以上的核酸檢測,用于新冠病毒檢測的假陰性率高?
發(fā)布時間:2020-02-13 18:00:00來源:

最近,新冠病毒檢測假陰性問題討論度頗高。核酸檢測一直被認(rèn)為是感染性疾病診斷的金標(biāo)準(zhǔn)。通常,核酸檢測試劑盒的準(zhǔn)確度可達(dá)95%以上。為什么新冠病毒呼吸道的假陰性率高呢?這其中包含了很多方面的原因,比如試劑盒的檢測限、采集標(biāo)本的質(zhì)量、標(biāo)本保存運送情況、檢測實驗操作、結(jié)果判讀等很多方面。


其中采集標(biāo)本的質(zhì)量是非常重要的因素。拭子上病毒的量越多,就越容易檢測出來。相反,拭子上病毒的量太少,就可能出現(xiàn)假陰性的情況。影響拭子上病毒量的因素主要有兩個。




第一個因素

是疾病特點決定的



不同的病程,不同部位,可采集到的病毒量都有很大差別。根據(jù)《新型冠狀病毒實驗室檢測技術(shù)指南》,呼吸道檢測樣本的類型有上呼吸道標(biāo)本(咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物),下呼吸標(biāo)本(深咳痰液、呼吸道抽取物、支氣管灌洗液、肺泡灌洗液、肺組織活檢標(biāo)本)。新冠病毒主要感染下呼吸道及肺部,下呼吸道采集優(yōu)于上呼吸道采集,病毒多,最易檢出。但采集越深部的樣本,對患者的創(chuàng)傷越大。




第二個因素

是采集技術(shù)導(dǎo)致的





尤其對于上呼吸道標(biāo)本,病毒載量本來就比較低,如果采集操作不規(guī)范,便會導(dǎo)致實際上采到的拭子上的病毒量更少。由于采集技術(shù)不過關(guān),而出現(xiàn)檢測的假陰性,在呼吸道檢測中屢見不鮮。


雖然下呼吸道標(biāo)本更優(yōu),但咽拭子采集速度快,采集容易,創(chuàng)傷更小,對于患者和標(biāo)本采集人員都更為方便。因此上呼吸道標(biāo)本占了相當(dāng)高的比例。如果能夠提高上呼吸道采樣技術(shù)能力,從而降低假陰性率,這將非常有意義。以下是口咽拭子和鼻咽拭子采集的方法和注意事項。




口咽拭子采樣流程





1. 準(zhǔn)備清水,讓患者漱口(不能漱口者少量飲水并咽下);

2. 取出咽拭子,讓患者頭部微仰,嘴張大,發(fā)“啊”音,露出兩側(cè)咽扁桃體。

3. 手持拭子在患者兩側(cè)咽扁桃體以及咽后壁各旋轉(zhuǎn)拭抹3~5次。

4. 迅速將拭子采集端浸入保存液中,拭子沿斷點折斷,棄去尾部。

5. 旋緊管蓋,輕輕搖晃,并用封口膜封閉管蓋。

6. 按照試劑盒說明的環(huán)境條件進行保存,并及時送檢。


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注意事項





1.標(biāo)本采集管先貼好條形碼,盡可能采集患者發(fā)病3d以內(nèi)的口咽拭子標(biāo)本。

2.為減少暴露風(fēng)險,采集人員應(yīng)加強個人防護。

3.在操作前應(yīng)向患者及家屬做好解釋工作。

4.拭子必須充分接觸兩側(cè)咽扁桃體和咽后壁。

5.采集時,拭子應(yīng)在兩側(cè)扁桃體和咽后壁上充分旋轉(zhuǎn),旋轉(zhuǎn)的力度應(yīng)把握好。




鼻咽拭子采樣流程





1. 清除鼻腔前端的分泌物(如必要);

2. 以拭子測量鼻尖到耳垂的距離,并用手指做標(biāo)記。

3. 將拭子以垂直鼻子(面部)方向插入鼻腔,從下鼻道深入抵達(dá)鼻咽后壁,直到標(biāo)記位置或觸壁遇阻。(拭子深入距離最少應(yīng)達(dá)耳垂部位到鼻尖長度的一半)。

4. 使拭子在鼻內(nèi)停留15~30s,輕輕旋轉(zhuǎn)3~5次。

5. 迅速將拭子采集端浸入保存液中,拭子沿斷點折斷,棄去尾部。

6. 旋緊管蓋,輕輕搖晃,并用封口膜封閉管蓋。

7. 按照試劑盒說明的環(huán)境條件進行保存,并及時送檢。


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注意事項





1. 標(biāo)本采集管先貼好條形碼,盡可能采集患者發(fā)病3d以內(nèi)的鼻咽拭子標(biāo)本。

2. 為減少暴露風(fēng)險,采集人員應(yīng)加強個人防護,并可選擇側(cè)位站立。

3. 采集時,拭子應(yīng)朝垂直鼻子(面部)方向,而不是頭頂方向伸入。

4. 采集時,拭子應(yīng)在鼻粘膜上充分旋轉(zhuǎn),旋轉(zhuǎn)的力度應(yīng)把握好。






除了標(biāo)本采集,標(biāo)本的保存和運送過程也很關(guān)鍵,采集的拭子應(yīng)盡量放在保存液中。有些情況下實驗室會用生理鹽水代替保存液,這點不建議。因為保存液中一般會有蛋白變性劑和核酸酶抑制成分,蛋白變性劑可使病毒失活并釋放其核酸,核酸酶抑制成分可維持標(biāo)本的穩(wěn)定性,使核酸不易發(fā)生降解。而生理鹽水就沒有這些功能了。


標(biāo)本采集后應(yīng)盡快送檢。如不能馬上檢測,那么標(biāo)本需要在合適的溫度(具體參照說明書)下進行保存,以防止RNA降解。如果標(biāo)本送檢人員不了解RNA極易降解的特性,很可能發(fā)生送檢不及時、保存溫度不當(dāng)而使核酸發(fā)生降解的情況。此時,無論使用多么精準(zhǔn)的檢測試劑盒都可能報出假陰性的檢測結(jié)果。


另外一點就是提取前的滅活處理。為了減小檢測人員的職業(yè)暴露風(fēng)險,最好是將病毒先進行滅活,再進行后續(xù)實驗。目前很多實驗室采用高溫滅活的方式,這個高溫滅活過程可能會降低檢測的陽性率。建議使用有滅活功能的拭子保存液,省卻高溫滅活的環(huán)節(jié)。


最后,分子檢測實驗室在核酸提取、擴增等步驟都要遵循標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程,才能得到更準(zhǔn)確的檢測結(jié)果,為臨床和患者出具可信的報告。



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